HL-7702【HL-7702】細胞培養常見問題

HL-7702【HL-7702】細胞常見問題 1：

液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

答：要冷藏！！因為液體培養基冷凍后再化凍時，其溶液的pH值會發生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響,對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月~一年。

HL-7702【HL-7702】細胞常見問題 2：

培養液pH對細胞生長的影響有哪些？

答：由于大多數細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產生不良的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環境中更利于細胞生長。因此，我們在配制培養用液時，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

HL-7702【HL-7702】細胞常見問題3：

細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？

答：不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。

培養細胞每次進行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶，以便于將含血清的培養基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。

細胞中心通常使用的消化液濃度為：

（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

（3）0.25% 胰蛋白酶

    溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。

多數細胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液。

HL-7702【HL-7702】細胞常見問題4：

培養細胞狀態欠佳原因有哪些：

答：1、  培養基的新鮮程度：一般加入血清后的*培養基，2周內用完。否則血清有效成分失活，影響細胞培養。

         建議：*培養基一次不要配太多，200ml以下?；蚋鶕昧繘Q定。

 2、  細胞外源微生物的污染：細胞不宜長期體外培養，因為外源微生物污染的幾率大大提高。易發現和難發現的。影響細胞狀態。

        建議：實驗前凍存一批細胞，隔幾個月重新復蘇。即保證實驗所用細胞代數一致，又將外源污染的后果降到zui低。

3、  排除其他原因：如更換培養條件（血清、培養基等）；使用器皿的潔凈程度；

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